dinaminė BIOSENSORS heliX cyto pilnai automatizuota laboratorinė analizės sistema

Specifikacijos

• Produkto pavadinimas: heliX cyto
• Gamintojas: Dynamic Biosensors GmbH
• Versija: 1.0

Informacija apie produktą

• „heliX cyto“ sistema skirta vienos ląstelės sąveikos citometrijai (scIC), skirta fluorescenciškai žymėtų molekulių prisijungimo prie taikinių ląstelių paviršiuje kinetikai matuoti laike nustatyta tvarka.

Produkto naudojimo instrukcijos

Naudojant heliXcyto mikroschemą

• „heliXcyto“ luste yra vienas mikrofluidinis kanalas su elektrodų taškais ląstelėms fiksuoti ir matuoti. Įsitikinkite, kad lustas tinkamai išdėstytas, ir laikykitės ląstelių fiksuoti skirtų instrukcijų.

Priežiūros lustas

• Priežiūros lustą naudokite tik valymo, bandymo ir priežiūros operacijoms. Venkite jo naudoti eksperimentams, kad išvengtumėte užteršimo.

Veikimo buferis

• Matavimų metu naudokite 1-ąjį veikimo buferį (RB 1). Išsamesnės informacijos ieškokite pagrindiniame vadove esančiame scIC suderinamumo lape.

Sensorgramų analizė

• Matavimų metu realiuoju laiku stebėkite sensorgramą „heliOS“ programinėje įrangoje. Analizuokite fluorescencinį atsaką laikui bėgant, kad nustatytumėte kinetinius greičius.

Pasyvavimas

• Apsvarstykite galimybę naudoti pasyvavimą kaip papildomą veiksmą, kad išvengtumėte analitės adsorbcijos, inkubuodami pasyvavimo reagentą ant lusto.

Normalizavimas

• Normalizavimas yra procesas, skirtas duomenų standartizavimui palyginimui ir analizei. Laikykitės normalizavimo procedūrų, kaip nurodyta vartotojo vadove.

ĮVADAS

• Šis vadovas skirtas kaip trumpas apžvalginisview apie „heliXcyto“ sistemą ir jos galimybes. Visi skyriai yra išsamiai aprašyti pagrindiniame „heliXcyto“ vadove, kurį rasite adresu https://www.dynamic-biosensors.com/helios-download-latest/

heliXcyto terminologija, vienos ląstelės sąveika, citometrija

• Vienos ląstelės sąveikos citometrija (scIC) – tai technologija, kuri matuoja fluorescenciniu būdu žymėtos molekulės (analitės) prisijungimo prie taikinio (ligando) kinetiką ląstelės paviršiuje, registruodama fluorescencinį signalą laike išskaidytu būdu.

Analitė

• Analitė yra fluorescenciniu būdu žymėta molekulė mobiliojoje fazėje, kuri gali prisijungti prie taikinio ląstelės paviršiuje.

Ligandas

• „Ligandas“ – tai pavadinimas, vartojamas „heliOS“ programinėje įrangoje, apibūdinantis ląstelės paviršiuje esantį taikinį, prie kurio gali prisijungti analitas. Tai gali būti receptoriaus molekulė, lipidas, cukrus arba kita ląstelės paviršiaus molekulė.

Ląstelių gaudyklė

• Ląstelių gaudyklės yra pralaidžios srautui, biologiškai suderinamos polimerinės kameros, esančios „heliXcyto“ luste. Jos skirtos fiksuoti ir imobilizuoti skirtingo dydžio ląsteles nuo maždaug 6 iki 25 µm srauto kanale. Ląstelių gaudyklės yra trijų skirtingų dydžių: mažos, vidutinės ir didelės.

heliXcyto lustas

• „heliXcyto“ lustuose yra vienas mikrofluidinis kanalas su angomis kiekvienoje pusėje. Kanalo viduryje yra du auksiniai elektrodų taškai.
• Viena vieta naudojama kaip atskaitos vieta, o antroje vietoje yra 3D biologiškai suderinami polimeriniai narveliai ląstelėms fiksuoti ir ji naudojama kaip matavimo vieta. Matavimo vietoje gali būti 1 arba 5 to paties tipo gaudyklės.
• Atskaitos taškas leidžia realiuoju laiku palyginti surinktą fluorescencinį signalą. „heliXcyto“ lustas yra daugkartinio naudojimo ir vienkartinis.

Priežiūros lustas

• Priežiūros lustas yra vieno kanalo mikrofluidinis lustas, naudojamas visoms valymo, bandymo ir priežiūros operacijoms.
• Šios operacijos apima valymo ir miego režimą, pažadinimo ir pripildymo režimą, sistemos plovimą ir skysčių testą. Šio lusto negalima naudoti atliekant tikrus eksperimentus su ląstelių / baltymų tirpalais, kad būtų išvengta tolesnio lusto užteršimo.

Veikimo buferis

• Veikimo buferis yra buferis, naudojamas „heliXcyto“ įrenginyje matavimo metu. Paprastai rekomenduojama naudoti 1-ąjį veikimo buferį (RB 1).
• Daugiau informacijos rasite scIC suderinamumo lape, esančiame pagrindiniame vadove.

Sensorgrama

• scIC sensorgrama yra fluorescencijos atsako grafikas, išreikštas skaičiais per sekundę (cps) laikui bėgant, iliustruojantis sąveikos eigą ląstelėse arba ant jų. Ši kreivė gali būti viewrealiuoju laiku „heliOS“ programoje matavimo metu.
• Analizuojant sensorgramas, nustatomas geriausiai stebimiems fluorescenciniams kreivėms tinkantis eksponentinis dydis ir išskiriami kinetiniai greičiai (kon, koff).

Pasyvavimas

• Pasivavimas yra pasirenkamas tyrimo etapas, kurio metu ant mikroschemos įpurškiamas pasyvavimo reagentas ir inkubuojamas, kad blokuotų paviršius. Tai gali padėti išvengti analitų adsorbcijos ant mikroschemos medžiagų.

Normalizavimas

• Normalizavimo etapas naudojamas siekiant atsižvelgti į nedidelius signalų skirtumus, atsirandančius dėl signalo surinkimo iš kiekvienos matavimo vietos atskiru detektoriumi. Tyrimo pradžioje įpurškiamas apibrėžtos koncentracijos fluorescencinis dažiklis (remiantis didžiausia analitės koncentracija ir analitės žymėjimo laipsniu). Šis normalizavimo etapas automatiškai įtraukiamas į matavimo metodą, o išmatuota normalizavimo smailė naudojama automatiškai koreguoti detektorių skirtumus duomenų analizės metu, prieš atliekant atskaitos taško nustatymą realiuoju laiku.

scIC matavimo principai

scIC programos

• Vienos ląstelės sąveikos citometrija (scIC) matuoja fluorescenciniu būdu žymėto analito jungimosi prie taikinio tiesiai ant gyvų ląstelių ir atsijungimo nuo jo kinetinį greitį bei afinitetą.
• Analitų aptikimas scIC metodu nepriklauso nuo dydžio, todėl tinka bet kuriai molekulei nuo subnm iki > 100 nm ir visoms molekulių klasėms – nuo ​​mažų molekulių, peptidų, aptamerų, nanokūnų, afikūnų, antikūnų, bispecifinių antikūnų formatų, baltymų, baltymų kompleksų iki pūslelių (egzosomų), lipidų nanodalelių ir virusų.

scIC technologija gali būti taikoma šiose srityse:

• signalo matavimas amplitudes įrišimo širmose
• Kon ir Koff greičių kinetinė analizė
• Afiniteto ir avidumo vertinimas naudojant koff ir bifazinius atitikimo modelius
• specifiškumo testai
• santykinis membraninių baltymų kiekybinis nustatymas ląstelės paviršiuje
• epitopų sujungimo ir konkurencijos tyrimai
• slopinimo tyrimai
• tikslinių baltymų internalizacijos įvertinimas

„heliXcyto“ aparatinės įrangos galimybės

Skysčių sistema

• „heliXcyto“ skysčių sistema maitinama iš iki 3 skirtingų buferinių butelių, todėl galima keisti darbinio ir palaikomojo buferio kiekį. „heliXcyto“ siurblius galima nustatyti srauto greičiui nuo 20 iki 500 µL/min., atsižvelgiant į skirtingus poreikius.ampir tyrimo reikalavimai. Lusto srauto kanalas prie skysčių sistemos jungiasi per dvi angas. Kairioji anga yra prijungta prie...ample, buferio ir plovimo linijos, o dešinioji anga yra sujungta su regeneracijos linija.
• Ši dvikryptė skysčių sistema leidžia stabiliai fiksuoti ląsteles vykdant skirtingus matavimo etapus ir galiausiai regeneruojant lustą, kad jį būtų galima pakartotinai naudoti analizės metu.
• 1 pav. Lustų integravimas į skysčių sistemą

Optinė sistema

• Fluorescencinį signalą sužadina raudoni ir žali šviesos diodai (LED) ir aptinka keturi vieno fotono skaitikliai, kurie renka raudonus ir žalius signalus iš kiekvienos vietos per visą kanalo gylį.
• Toje pačioje matavimo vietoje galima vienu metu stebėti du nepriklausomus signalus, todėl dviejų spalvų analizės sistemoje vienu metu galima išmatuoti dvi sąveikas.
• 2 pav. Optikos sąranka
• Signalo rinkimą iš kiekvienos matavimo vietos tvarko atskiras detektorius, todėl neapdoroti skaičiai gali šiek tiek skirtis. Siekiant tai įvertinti, į duomenis generuojančius tyrimus automatiškai įtraukiamas normalizavimo žingsnis.
• Be pavienių fotonų skaitiklių, prietaisas turi CCD kamerą ir atspindėtos šviesos mikroskopą. Šie įrankiai leidžia realiuoju laiku vaizduoti ląsteles, vertinant ląstelių vientisumą ir analitės kokybę viso matavimo metu.
• Ši kombinuota sistema užtikrina, kad būtų stebimos ir sąveikos, ir biologinės sąlygos, pateikiant išsamų eksperimento įvertinimą.

scIC darbo eiga

scIC matavimo procesą galima suskirstyti į 3 pagrindinius etapus

1. Eksperimentinis dizainas „heliOS“ sistemoje: Kiekvienas matavimas pradedamas nuo eksperimento planavimo „heliOS“ programinėje įrangoje. Tyrimo darbo eiga nustatoma pasirenkant iš anksto nustatytus metodus ir koreguojant eksperimentinius parametrus, pvz., naudojamą ląstelių liniją, analitės koncentraciją ir buferio sąlygas. „heliOS“ automatiškai apskaičiuoja tikslų ląstelių, analitės, buferio ir kitų matavimui reikalingų tirpalų kiekį, supaprastindama paruošimo procesą.
2. Buferių, analitų ir ląstelių paruošimas: Užbaigus eksperimentinį planą, reikiamos medžiagos paruošiamos pagal „heliOS“ pateiktas specifikacijas. Buferiai, analitai ir ląstelės įkeliami į prietaiso automatines sistemas.ampler.
3. Matavimas ir duomenų analizė: Sistema atlieka suplanuotą automatinių realaus laiko sąveikos matavimų seriją, nereikalaujanti jokio tolesnio naudotojo įsikišimo. Duomenys gali būti analizuojami dar vykdant matavimą, kad būtų galima iš karto gauti įžvalgų apie rezultatus.

scIC tyrimai heliOS sistemoje

Be duomenis generuojančių tyrimų, programinė įranga taip pat teikia lustų testavimo, valymo ir prietaisų priežiūros metodus.

1 lentelė. Patvirtinti duomenis generuojantys tyrimai

scIC kinetika	Matuoja visą kinetiką ląstelėse, analitės asociaciją galima reguliuoti nuo 1 iki 5 koncentracijų, o po didžiausios koncentracijos atliekama viena disociacija. Žalias arba raudonas kanalas. Yra galimybė atlikti tik analitės tyrimą.
scIC kinetika – dviejų spalvų	Matuoja visą ląstelių kinetiką, analitės asociaciją galima reguliuoti nuo 1 iki 5 koncentracijų, o po didžiausios koncentracijos seka viena disociacija. Žalias ir raudonas kanalai įjungti vienu metu. Yra galimybė atlikti tik analitės testą.
scIC disociacija – dviejų spalvų	Matuoja analitės disociaciją iš ląstelių, kurios buvo iš anksto inkubuotos su fluorescenciniu būdu pažymėta analite su žaliu ir (arba) raudonu kanalu.

scIC matavimo paruošimas ir tyrimo kūrimas

Prieš atliekant scIC matavimą, reikia apsvarstyti kelis dalykus.

• Analito koncentracija, ženklinimo laipsnis, savybės ir kokybė.
• Normalizavimo sprendimas ir sužadinimo galia.
• Ląstelės kokybė ir valdymas.

Analito koncentracija ir žymėjimo laipsnis

• Pagal standartinę kinetinių matavimų praktiką, kelių koncentracijų kinetikai rekomenduojame pasirinkti analitės molinės koncentracijos diapazoną nuo 0.1 iki 10 kartų didesnį už numatomą pusiausvyros disociacijos konstantą (Kd). Vienos koncentracijos kinetikos arba disociacijos matavimams analitės koncentracija turėtų būti nuo 1 iki 10 kartų didesnė už numatomą Kd. Reikalingas analitės tūris, apskaičiuotas 10 minučių asociacijos laikui ir 25 µL/min. srautui, sudaro maždaug 300 µL.
• Idealiu atveju analitės žymėjimo laipsnis (DOL) turėtų būti 1, nors 2 arba 3 DOL vertės vis dar yra priimtinos. Tačiau atminkite, kad didesnis analitės žymėjimo laipsnių skaičius gali turėti įtakos jos jungimosi savybėms ir padidinti agregacijos arba nespecifinio jungimosi tikimybę. Norint pasiekti optimalų DOL, vadovaukitės protokolu, pateiktu su žymėjimo rinkiniais, kuriuose yra raudonų arba žalių dažų iš „heliXcyto“ reagentų linijos.
  Normalizavimas
• Normalizavimas yra pirmasis visų duomenų generavimo metodų žingsnis. Jis kompensuoja nedidelius signalo pokyčius, atsirandančius dėl atskirų detektorių naudojimo kiekvienai matavimo vietai. Šiame etape tyrimo pradžioje įpurškiamas fluorescencinis dažiklis, kurio koncentracija nustatyta vartotojo.
• Normalizavimo tirpalo koncentracija apskaičiuojama padauginus didžiausią matavime naudotą fluorescenciniu būdu pažymėtos analitės koncentraciją iš analitės ženklinimo laipsnio (DOL). Ši koncentracija lemia matavimo metu taikomą LED sužadinimo galią. Tikslas – kad normalizavimo tirpalo pikas pasiektų maždaug tokį patį fluorescencijos signalą. ampšviesumas kaip didžiausia analitės koncentracija.
• Norėdami nustatyti pradines vertes, žr. pagrindinio vadovo normalizavimo tirpalo koncentracijos lentelę. Atkreipkite dėmesį, kad diagrama nurodo pradinius nustatymus, tačiau LED sužadinimo galią galima toliau reguliuoti tyrimo kūrimo metu.

Ląstelių kokybė ir paruošimas

• Ląstelių gyvybingumas turėtų būti didesnis nei 95 %, o ląstelės paprastai turėtų būti geros būklės. Prilipusioms ląstelėms rekomenduojame dirbti su 50–70 % susiliejusiomis ląstelėmis.
• Suspensijos ląsteles rekomenduojame surinkti augimo log fazės viduryje. Vienam bandymui reikia 50 µl ląstelių suspensijos, kurios koncentracija yra 1E+06 ląstelių/ml.

Suspensijos ląstelių surinkimas

1. Centrifuguokite maždaug 2E+06 ląsteles 300 g greičiu 7 minutes, kad pašalintumėte ląstelių kultūros terpę. Išmeskite supernatantą.
2. Ląsteles vieną kartą nuplaukite, resuspenduodami ląstelių nuosėdas maždaug 1 ml DPBS. Suspensiją centrifuguokite 400 g greičiu 5 minutes, kad susidarytų gyvų ląstelių nuosėdos. Atsargiai pašalinkite supernatantą, kad pašalintumėte fragmentus ir terpę.
3. Švelniai suspenduokite 1 ml DPBS, perkelkite suspensiją ant ląstelių filtro ir nukoškite suspensiją gravitacijos būdu.
4. Išmatuokite ląstelių koncentraciją perkoštoje suspensijoje ir pakoreguokite iki 1E+06 ląstelių/ml.
   • PATARIMAS: Kai kurios suspensijos ląstelės linkusios formuoti sankaupas. Švelniai resuspenduokite sankaupas ir prieš pirmąjį centrifugavimo etapą nukoškite.
   • Dirbdami su ląstelių suspensijomis, naudokite plačius pipetės antgalius, kad perkėlimo ar resuspendavimo metu išvengtumėte didelių šlyties jėgų.

Prilipusių ląstelių surinkimas

1. Ląsteles nuplaukite steriliu DPBS tirpalu.
2. Ląsteles iš kultivavimo kolbos atskirkite naudodami jums patinkantį disociacijos reagentą (pvz., TrypLE).
3. Disociuotas ląsteles resuspenduokite iki pageidaujamo terpės tūrio ir filtruokite 30 nm ląstelių filtru.
4. Pasirinktinai, jei ląstelės stipriai prilipusios, įpilkite EDTA (galutinė koncentracija 5 mM).
5. Ląsteles centrifuguokite 300 g greičiu 7 minutes, kad pašalintumėte ląstelių kultūros terpę. Supernatantą išmeskite.
6. Ląsteles resuspenduokite 1 ml DPBS.
7. Išmatuokite ląstelių koncentraciją ir pakoreguokite iki 1E+06 ląstelių/ml.
   • PATARIMAS: Ląstelių terpės, praskiestos 1:4 su DPBS, gali būti naudojamos maistinėms medžiagoms į ląsteles įtraukti.ampjei ląstelės yra jautrios arba tyrimo eiga ilga.

Ląstelių fiksacija

1. Centrifuguokite iki 10E+06 ląstelių 300 g greičiu 7 minutes, kad pašalintumėte ląstelių kultūros terpę. Išmeskite supernatantą.
2. Ląstelių nuosėdas resuspenduokite 1 ml PBS, centrifuguokite ir supernatantą išmeskite.
3. Ląstelių nuosėdas resuspenduokite 500 µL PBS/2 % PFA (62.5 µL 16 % PFA tirpalo + 437.5 µL PBS).
4. Ląsteles inkubuokite kambario temperatūroje 10 minučių (pertraukiamai švelniai pakratydami).
5. Įpilkite 500 µl PBS ir centrifuguokite suspensiją 400 g greičiu 5 minutes, kad pašalintumėte PFA.
6. Išmeskite supernatantą.
7. Ląsteles resuspenduokite 1 ml PBS, filtruokite per 30 µm ląstelių filtrą, centrifuguokite (400 g, 5 min.) ir pašalinkite supernatantą.
8. Ląsteles resuspenduokite maždaug 1 ml PBS (nebūtina: pakoreguokite iki galutinės 5E+06 ląstelių/ml koncentracijos).
9. Fiksuotas ląsteles laikyti 2–8 °C temperatūroje, suvartoti per mėnesį.
   • Jei reikia pataisyti daugiau langelių, atitinkamai padidinkite visus kiekius.
   • PASTABA: Centrifugavimo greitis ląstelių surinkimo metu gali būti koreguojamas pagal ląstelių tipą, jei ląstelės yra jautrios ir dažniausiai naudojamos mažesnės g jėgos.
   • PFA koncentracija gali svyruoti nuo 0.5 iki 4 %.

scIC tyrimo sąranka

Šie scIC tyrimai turėtų būti įtraukti į tyrimo kūrimą ir vėliau gali būti pakartoti tyrimo darbo eigoje.

Tyrimo kūrimo darbo eiga yra padalinta į 3 atskirus nuoseklius veiksmus:

1. Citochipų testas
2. Tik analitės testas
3. Kinetikos tyrimas

Citochipų testas

• Prieš naudojant citoplazmos lustą matavimui, reikia įvertinti naujo lusto kokybę. Pradėkite atlikdami atskirą citoplazmos lusto testą. Žr. pagrindinio vadovo skyrių „Helix“ citoplazmos lustas, kaip nustatyti ir įvertinti lusto testą.

Tik analitės testas

• scIC tyrimo kūrimas pradedamas nuo „Tik analitės testo“, kuris įvertina fluorescenciškai žymėtų analitų elgseną ant šviežio lusto paviršiaus be ląstelių.
• Šį testą taip pat galima periodiškai kartoti, siekiant įvertinti paženklintų analitų stabilumą. scIC tik analitų testą galima konfigūruoti kinetikos tyrimuose, įjungiant žymimąjį langelį „tik analitas“ dalyje „ląstelės nustatymai“.
• Analitės kokybei įvertinti pakanka didžiausios naudotos koncentracijos, kurią galima konfigūruoti išjungiant visas, išskyrus vieną, asociacijas tyrime.

Kinetikos tyrimo darbo eigos sąranka

• Kinetinis tyrimas paprastai naudojamas automatizuotame darbo eigoje, apimančioje tiek duomenis generuojančius tyrimus, tiek palaikymo elementus. Kai analitas praeina kokybės kontrolės tik analitės testą, jį galima naudoti ląstelių matavimui.
• Norint patikimai įvertinti kinetinius greičius, signalo atsakas asociacijos metu turėtų priklausyti nuo koncentracijos ir didėti didėjant analitės koncentracijai.
• Didžiausia koncentracija turėtų pasiekti stabilizavimosi ribą, kuri rodo, kad buvo pasiekta pastovi prisijungimo būsena. Disociacija turi būti vykdoma pakankamai ilgai, kad būtų atsirišusi didelė dalis surištos analitės (daugiau nei 5 %), kad būtų galima patikimai pritaikyti kreivę.
• Kaip pradinį tašką naudokite numatytuosius analizės sąlygų parametrus ir pakoreguokite juos, atsižvelgdami į rezultatus.

Examp1. Rekomenduojama tyrimo darbo eiga

Tyrimo darbo eiga leidžia vartotojams sudaryti matavimo ir priežiūros metodų eilę pagal konkrečius eksperimentinius poreikius.

Tyrimo darbo eiga gali apimti šiuos veiksmus nurodyta tvarka:

1. Prime (priežiūros lustas)
2. scIC kinetika (ląstelės A, analitė A, cito lustas)
3. Sistemos plovimas (priežiūros lustas)
4. scIC kinetika (ląstelės B, analitė A, cito lustas)
5. Sistemos plovimas (priežiūros lustas)
6. Tik analitei sukonfigūruota scIC kinetika (analitė A, cito lustas)
   • Užpildymo ir sistemos plovimo etapai atliekami naudojant techninės priežiūros mikroschemą. Sistemos plovimas atliekamas perjungiant į kitą ląstelių liniją ir prieš atliekant tik analitės testą darbo eigos pabaigoje.
   • Daugiau informacijos rasite pagrindinio vadovo skyriuje apie Cyto sistemos plovimą.
   • Sudarant ląstelių kinetikos tyrimus eilėje, reikia atsižvelgti į ląstelių gyvybingumą, kuris priklauso nuo ląstelių linijos.
   • Jautrioms ląstelių linijoms rekomenduojama atlikti tik 1–2 tyrimus per vieną tyrimo darbo eigą. Atsparesnėms ląstelių linijoms galima įtraukti papildomų tyrimų.
   • PASTABA: Papildomiems tyrimams ląstelių tirpalą ruoškite atskiruose buteliukuose, suteikdami ląstelėms skirtingus pavadinimus.
   • Įsitikinkite, kad visi reagentai yra švieži ir filtruoti per 0.22 µm filtrą. Galiausiai paruoštus reagentus sudėkite į prietaisą, kaip nurodyta „heliOS“.
   • Tyrimą galima pradėti spustelėjus mėlyną rodyklę „Vykdyti“ ir atliekant veiksmus, nurodytus tyrimo pradžios vedlyje.
   • Pradėjus tyrimą, įrenginys veikia nepriklausomai, kol baigiamas visas tyrimo procesas.

scIC eksperimentų analizė

scIC analizės darbo eiga

• scIC duomenys gali skirtis nuo standartinių biosensorių duomenų dėl natūralaus įvykių, vykstančių ląstelėse, užfiksuotose ant heliXcyto lusto paviršiaus, sudėtingumo, dėl kurio gali atsirasti sensorinės diagramos pažeidimų.
• Todėl kiekviename matavimo etape užfiksuotų vaizdų ir automatinės analizės nukreipimo puslapyje sugeneruotų sensorinių diagramų kokybės kontrolė yra pabrėžiama.
• Be to, „heliOS“ teikia įrankius, skirtus sensorinės diagramos pažeidimams spręsti atliekant rankinę scIC duomenų analizę.

scIC duomenų analizės procesas:

1. Vaizdo apžiūra:
   • Patikrinkite visus matavimo metu užfiksuotus vaizdus (eksperimento lange, skirtuke „Vaizdai“).
   • Kiek ląstelių stabiliai išliko gaudyklėse per visą matavimą?
   • Kokia yra ląstelių būsena? Patikrinkite detalumą ir ląstelių vientisumą.
   • Ar gaudyklės švarios po regeneracijos etapo?
2. Neapdorotų duomenų patikrinimas:
   • Išnagrinėkite neapdorotus 1 atskaitos taško ir 2 matavimo taško duomenis.
   • Normalizavimo piko signalas turėtų būti artimas arba aukštesnis už didžiausią neapdorotų duomenų signalą.
   • Ar signalas grįžta į pradinį lygį abiejose vietose, ar yra nespecifinio surišimo įrodymų?
3. Normalizuotų duomenų patikrinimas:
   • Ar 1 ir 2 taškų įpurškimo šuoliai tinkamai persidengia?
4. Nuorodų duomenų patikrinimas:
   • Ar regeneracijos etapas grąžina signalą į pradinį lygį? Jei ne, patikrinkite, ar po regeneracijos gaudyklėse yra ląstelių ar šiukšlių, pakartotinai atlikdami tyrimą.viewvaizdų.
   • Ar nurodytose kreivėse yra smaigalių, išskirtinių reikšmių ar kitų neatitikimų? Jei taip, dar kartąview vaizdus, ​​kad nustatytumėte galimas priežastis ir apsvarstytumėte rankinį koregavimą.
5. Duomenų atitikties patikrinimas:
   • Vizualinės kokybės vertinimas
   • Ar atitikimas tiksliai apibūdina kreivių elgseną, ar atitikimo linija kerta sensorgramą?
   • Ar atitikimas tinkamai apibūdina duomenų kreivumą?
   • Ar yra ampAr šviesumas atitinka nurodytus duomenis?

scIC automatizuota duomenų analizė

• Automatizuota „scIC“ analizė vos keliais paspaudimais apdoroja neapdorotus duomenis į kokybės kontrolės grafikus ir pritaiko duomenis.
  1. Atidarykite scIC eksperimentą dukart spustelėdami pasirinktą eksperimentą eksperimentų sąraše.
  2. Spustelėkite didelį mėlyną mygtuką „Analizuoti“, esantį eksperimento skirtuko apačioje.
  3. Eksperimento darbo eigoje pasirinkite norimą analizuoti tyrimą.
  4. Iš galimų analizės tipų pasirinkite „Kinetics scIC“ ir spustelėkite „Toliau“.
     • PASTABA: Jei eksperimentas vis dar vykdomas, sąraše bus rodomi tik užbaigti tyrimai. Pasirinkus tyrimą, kitame lange bus rodomi visi galimi analizės tipai, būdingi naudojamam metodui / tyrimui.
  5. Jei reikia, sukonfigūruokite analizę šiame lange. Numatytasis pritaikymo modelis yra „Kinetika – laisvo galo lygis“ su aktyvuotu žymimuoju langeliu „Priversti pritaikyti galo lygį iki nulio“. Nuo šio modelio nukrypkite tik tuo atveju, jei biologijai ar duomenims reikalingas sudėtingesnis aprašymas.
  6. Kai konfigūracija bus baigta, spustelėkite „Analizuoti“, kad pamatytumėte visas gautas momentines kopijas, neapdorotas ir apdorotas sensorgramas bei kinetikos vertes.
• Dėl būdingo s sudėtingumoampNaudojant scIC tyrimus, gautos sensorinės diagramos gali turėti neatitikimų.
• Siekiant tai išspręsti, automatinėje analizėje akcentuojama vaizdų ir sensorinių diagramų kokybės kontrolė.
• Jei reikia rankinio taisymo arba išsamesnės analizės, rankinės analizės „Scratchpad“ pateikiamos artefaktų taisymo priemonės.

heliXcyto priežiūra ir dekontaminacija

• „heliXcyto“ priežiūra yra būtina siekiant užtikrinti optimalų prietaiso veikimą ir ilgaamžiškumą. Reguliarus techninis aptarnavimas apima valymo procedūras, kurios apsaugo nuo užteršimo ir palaiko sistemos vientisumą, užtikrindamos tikslius rezultatus ir sklandų veikimą. Nuolatinė priežiūra yra labai svarbi prietaiso patikimumui ir eksperimentinių rezultatų kokybei.
  „heliXcyto“ priežiūra apima dvi pagrindines procedūras: „Cyto“ sistemos plovimą, kurį galima tiesiogiai integruoti į tyrimo darbo eigą, ir „Clean & Sleep“, kuris atliekamas kaip atskira rutina, skirta prižiūrėti prietaisą prieš pat naudojimą po ilgesnio naktinio matavimo arba kai jis nenaudojamas ilgiau nei 2 dienas.
• Ir sistemos plovimui, ir valymui bei miegojimui lustų dėkle reikalinga „heliX® Maintenance“ mikroschema.

Švaros ir miego rutina

• „Clean & Sleep“ programa skirta valymui ir įrenginio išjungimui / laikymui. Metodo metu „heliX®“ įrenginio skysčių vamzdeliai pirmiausia praplaunami itin grynu vandeniu, o po to 70 % etanoliu. Galiausiai visi vamzdeliai išleidžiami oru.
• Ši valymo procedūra yra visiškai automatizuota ir trunka maždaug 40 minučių. Procedūros metu etanolis išpilamas į vandens butelį, todėl po to butelio turinį reikia išpilti.
• Po valymo ir miego režimo prietaisas pereina į miego režimą ir negali būti naudojamas, kol neatliekamas pažadinimas ir pripildymas. Abiem ciklams reikalingas „heliX®“ techninės priežiūros lustas.
• SVARBU: Kad išvengtumėte mėgintuvėlio užteršimo, po valymo procedūros būtinai išmeskite vandens buteliuko turinį (vandens ir etanolio mišinį) ir ištuštinkite atliekų talpyklą.

Išjungimas ir ilgalaikis saugojimas

• Jei ilgesnį laiką nenaudosite, po „Clean & Sleep“ procedūros išimkite vandens ir etanolio buteliuką iš buferinio dėklo ir palikite vamzdelį atvirą orui.
• Taip pat išimkite „heliX®“ techninės priežiūros lustą ir laikykite jį originalioje pakuotėje. Taip išvengsite atbulinio srauto ir užteršimo. Išjunkite įrenginį.

Cito sistemos plovimas

• „heliXcyto“ sistemos plovimo priemonė maždaug per 45 minutes kruopščiai išvalo mikrofluidinę sistemą naudodama valymo tirpalą 3 (CS3). CS3 surenkamas per dvi sekundes.tages. Pirmoji adata ir sampKilpa užpildoma ir inkubuojama, kad būtų pašalinti visi teršalai.
• PASTABA: Kai prietaisas naudojamas, bent kartą per dieną atlikite „Cyto System Wash“ plovimą. Rekomenduojame įtraukti „Cyto System Wash“ metodą į tyrimo darbo eigą po kiekvieno tyrimo (pereinant prie naujos ląstelių linijos arba jeiamp(jei failo kokybė yra neoptimali) arba iki tyrimo darbo eigos pabaigos. Pakeiskite priežiūros lustą po ne daugiau kaip 50 „Cyto System“ plovimų, kurie lustų dėkle rodomi kaip regeneracijų skaičius. view įrenginio valdymo skydelio.

Susisiekite

• Dynamic Biosensors GmbH
• Perchtinger g. 8/10
• 81379 Miunchenas
• Vokietija
• Bruker Scientific LLC
• Manningo kelias 40, Manningo parkas
• Billerica, MA 01821

JAV

• Užsakymo informacija order.biosensors@bruker.com
• Techninė pagalba support.dbs@bruker.com
• www.dynamic-biosensors.com
• Instrumentai ir lustai yra suprojektuoti ir pagaminti Vokietijoje.
• ©2025 Dynamic Biosensors GmbH
• Tik moksliniams tyrimams. Nenaudoti klinikinėse diagnostinėse procedūrose.

DUK

scIC DUK

Ar galiu pakartotinai naudoti „heliXcyto“ lustą?

Taip, „heliXcyto“ lustas yra daugkartinio naudojimo ir vienkartinis. Laikykitės tinkamų valymo ir laikymo nurodymų.

Kokia yra techninės priežiūros mikroschemos paskirtis?

Priežiūros lustas naudojamas valymo, bandymo ir priežiūros operacijoms, siekiant užtikrinti tinkamą sistemos veikimą.

Kaip dažnai turėčiau valyti įrenginį?

„heliXcyto“ skysčių sistema palaikoma švari naudojant „Cyto System Wash“ ir „Clean&Sleep“ metodus. Mikrofluidinę sistemą rekomenduojama valyti naudojant „Cyto System Wash“ su techninės priežiūros mikroschema po kiekvieno tyrimo (ypač keičiant ląstelių tipą) arba ne vėliau kaip tyrimo darbo eigos pabaigoje. „Clean&Sleep“ procedūra turi būti taikoma prieš pat naudojimą po ankstesnio ilgo matavimo (pvz., ryte po naktinio eksperimento) arba kai „heliXcyto“ nebus naudojamas ilgiau nei 2 dienas po išjungimo.

Kiek laiko tirpalai: RB 1 / vanduo / CS 1 / CS 3 / normalizavimo tirpalas gali būti laikomi įrenginyje?

Paprastai prieš kiekvieną matavimą visi tirpalai turi būti patikrinti, ar nėra likusio tūrio ir ar nėra drumstumo ar nuosėdų. Tokiu atveju tirpalą reikia nedelsiant pakeisti. Vanduo ir RB 1 turi būti keičiami kasdien, o RB 1 turi būti filtruojamas prieš kiekvieną matavimą. Praskiestą normalizavimo tirpalą galima naudoti 2 dienas iš eilės. Valymo tirpalai yra stabilūs maždaug 3 dienas.

Kiek laiko galiu naudoti „heliXcyto“ lustą?

„HeliXcyto“ mikroschemos galiojimo datą galima patikrinti „heliOS“ programos skiltyje „Įrenginys“ esančiame skirtuke „Lusto dėklas“. Pasibaigus galiojimo datai, mikroschemos vientisumas negarantuojamas. Nepaisant to, jei gaudyklės išlieka stabilios, paviršius švarus, o fluorescencijos fonas yra žemiau mikroschemos teste nurodytos ribinės vertės, mikroschema laikoma tinkama matavimams. Siekiant žymiai pailginti mikroschemos tarnavimo laiką, rekomenduojama reguliariai valyti išorinę mikroschemą (mikroschemos valymo rinkinys CCK-1-1).

Kiek laiko galiu naudoti priežiūros lustą?

Priežiūros lustą reikia pakeisti po 50 sistemos plovimų (skaičiuojamų kaip regeneracijos „heliOS“ įrenginio valdymo skirtuke „Lusto dėklas“).

Kaip dažnai reikia atlikti „heliXcyto“ mikroschemos testą?

Lusto testas renka informaciją apie fluorescencijos foną, švarą ir lusto vientisumą prieš pradedant naują eksperimentą. Jis turi būti atliekamas bent kartą, kai naudojamas naujas lustas, tačiau rekomenduojama jį atlikti prieš kiekvieną eksperimentą arba jo pradžioje, siekiant patikrinti lusto būseną. Tai leidžia pakoreguoti matavimo sąlygas ir atsekti sensorinių diagramų anomalijas iki lusto ar įrenginio.

Kas yra analitės žymėjimo chemija?

Mūsų žymėjimo rinkiniai atitinkamai raudoną arba žalią fluorescencinį dažiklį per NHS esterius jungia su pirminiais aminais baltymų analituose (pvz., lizinais arba N-galu). Išsamesnės informacijos ir trikčių šalinimo skyrių galite rasti mūsų „heliXcyto“ žymėjimo rinkinio raudonų dažų (ženklinimo rinkinys raudoniems dažams 2 CY-LK-R2-1) ir „heliXcyto“ žymėjimo rinkinio žalių dažų (ženklinimo rinkinys žaliiems dažams CY-LK-G1-1) vadovuose. webparduotuvė.

Kur rasti „heliOS“ prisijungimo duomenis ir licencijos informaciją?

Kredencialų ir licencijos informacijos įvedimo procesas aprašytas „heliOS“ diegimo skyriuje, pateiktame mūsų „heliXcyto“ vadove. websvetainė („heliXcyto“ vadovas). Jūsų licencijos informacija turėtų būti išsaugota „scIC“ aplanke, esančiame „heliXcyto“ kompiuterio darbalaukyje, kurį mūsų programų specialistas sukūrė mokymų metu.

Kokie yra „heliXcyto“ sužadinimo / emisijos diapazonai?

Raudonos spalvos sužadinimas yra 605–625 nm, emisija (detekcija) – 655–685 nm. Žalios spalvos sužadinimas yra 490–510 nm, žalios spalvos emisija – 525–575 nm.

Kiek kartų turiu atlikti tą patį eksperimentą, kad gaučiau statistinį patikimumą?

Norint gauti patikimus vidutinius kinetikos greičius, rekomenduojama atlikti 3–4 trijų koncentracijų kinetikos matavimų pakartojimus homogeninėje ląstelių populiacijoje. Nuosekliame duomenų rinkinyje pakartojimų asociacijos ir disociacijos greičiai turėtų būti 2–4 laiko intervalo ribose.

Koks yra scIC matavimų jautrumas?

Apatinė aptikimo riba, vertinant pagal taikinio raišką, priklauso nuo analitės žymėjimo, tačiau paprastai scIC jau gali išmatuoti kinetiką vos su 1000–10 000 molekulių vienoje ląstelėje. Siekiant padidinti jautrumą, rekomenduojama užfiksuoti bent 5 ląsteles, o analitės DOL (nuo 5 iki 10) ir LED galia turi būti subalansuoti, kad būtų pasiektas maksimalus fluorescencijos skaičius.

Kokios yra heliXcyto aptikimo ribos pagal kinetinius greičius?

Naujausius techninius apribojimus rasite „heliXcyto“ techninėse specifikacijose, kurias galite rasti „heliXcyto“ vadove („heliXcyto“ vadovas). Disociacijos konstanta Kd: nuo 10 pM iki 1 mM; Asociacijos greičio konstanta kon: nuo 1E3 iki 1E7 M-1s-1; Disociacijos greičio konstanta koff: nuo 1E-6 iki 1 s-1. Išsamesnės informacijos ieškokite mūsų „heliXcyto“ vadove, kurį rasite mūsų svetainėje. websvetainę.

Dokumentai / Ištekliai

dinaminė BIOSENSORS heliX cyto pilnai automatizuota laboratorinė analizės sistema [pdf] Naudotojo vadovas „heliX cyto“ visiškai automatizuota laboratorinė analizės sistema, „heliX cyto“, visiškai automatizuota laboratorinė analizės sistema, automatizuota laboratorinė analizės sistema, laboratorinės analizės sistema, analizės sistema, sistema

Nuorodos

• Vartotojo vadovas